流式细胞仪在收集大量细胞的基础上,可以根据细胞荧光强度的差异,从混合细胞群中鉴别出不同亚群,并对每一亚群的比例做出精确定量。流式通道主要分为散射光通道和荧光通道。散射光通道有两种,包括前向散射光(FSC)通道和侧向散射光(SSC)通道,而不同型号的流式细胞仪其荧光通道的多少差异较大。
借助流体系统,细胞悬液在通过流式细胞仪时,从小喷嘴中流出的细胞悬液在鞘液的流体力学作用下向中心聚拢,形成的细流可使细胞依次通过激光束,且一次仅一个细胞。借助光学系统,当细胞通过激光束时,检测器会检测到细胞或颗粒的散射光,放置在前面的检测器检测FSC,而放置在侧面的多个检测器检测SSC。
FSC值代表细胞的大小,细胞体积越大,其FSC值就越大。SSC值代表细胞的颗粒度(与细胞中所含的细胞器、细胞核等的数量成正比)。细胞越不规则,细胞表面的突起越多,细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多,其SSC值就越大。因此,借助FSC或SSC检测到的散射光,即根据细胞大小和颗粒度差异可区分各个细胞群。
荧光强度散点图,在实际操作中最为常见,图中不带有两种荧光的细胞(即“阴性细胞群”)会被分在Q1,就是两种荧光强度都很低的细胞群;相应地,Q3中的点就代表两种荧光强度都很高的“双阳性”细胞群。剩下的Q2和Q4中的点,代表单荧光标记的“单阳”细胞群。通过观察两种荧光染色的细胞分布,就可以判断双阳/单阳比例,进而圈出需要进一步研究的细胞群体。
流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。
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